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本發(fā)明涉及一種重型肝炎相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的檢測(cè)方法和試劑盒。 本發(fā)明通過(guò)表觀遺傳技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)，建立了人谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶 P1 （GSTP1）甲基化程度定性檢測(cè)平臺(tái)，為重型肝炎的預(yù)警、病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后預(yù) 測(cè)提供快捷、敏感、特異、可靠的科學(xué)檢測(cè)方法。

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:在中國(guó)癌癥發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì)，癌癥的治療效果不令人滿(mǎn)意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見(jiàn)效快的特點(diǎn)，在臨床已表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)，能顯著改善患者的生存質(zhì)量和延長(zhǎng)患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應(yīng)用面臨兩個(gè)主要問(wèn)題，一是靶向藥物的適用性問(wèn)題，其治療效果與患者的基因突變類(lèi)型密切相關(guān)，需要通過(guò)腫瘤患者的基因突變檢測(cè)來(lái)篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問(wèn)題，一般靶向藥物使用幾個(gè)月即可出現(xiàn)耐藥，可能產(chǎn)生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對(duì)少數(shù)患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測(cè)來(lái)指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化治療，并且在治療過(guò)程中通過(guò)對(duì)耐藥基因的檢測(cè)了解靶向藥物的療效變化進(jìn)一步指導(dǎo)靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時(shí)可避免無(wú)效用藥，節(jié)約社會(huì)成本。顯然采用靶向藥物的個(gè)性化治療方案可使患者受益最多，但受現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實(shí)現(xiàn)。由于目前的基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測(cè)標(biāo)本，但很多晚期癌癥病人不適合手術(shù)治療無(wú)法獲取組織樣本，而細(xì)針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對(duì)于手術(shù)患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監(jiān)測(cè)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)無(wú)樣可取的情況；同時(shí)由于檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，現(xiàn)有技術(shù)只能進(jìn)行單一突變檢測(cè)，不能同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，由于突變種類(lèi)較多，臨床檢測(cè)操作繁瑣，工作量較大。本項(xiàng)目針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的缺點(diǎn)進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測(cè)技術(shù)使基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性較現(xiàn)有技術(shù)提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測(cè)對(duì)象，并且可同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，簡(jiǎn)化了操作流程，節(jié)約了成本。 本項(xiàng)目的目的是開(kāi)發(fā)可以血液和組織樣品為檢測(cè)對(duì)象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測(cè)試劑盒，用于臨床指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化用藥，并將其推廣應(yīng)用。應(yīng)用范圍:與目前存在的基因突變檢測(cè)技術(shù)相比，本項(xiàng)目所采用的檢測(cè)技術(shù)具有更廣泛的適用性。本項(xiàng)目所采用的技術(shù)以病人血液為主要檢測(cè)標(biāo)本，可適用于所有肺癌和結(jié)直腸癌病人。由于具有高度的靈敏度和特異性，可在高野生型基因背景下進(jìn)行檢測(cè)，解除了傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)對(duì)病人標(biāo)本的限制。血液標(biāo)本采樣簡(jiǎn)單方便，與手術(shù)穿刺相比，極大的減輕了病人痛苦，也降低了取樣的成本，更容易得到病人的配合。對(duì)于繼發(fā)性耐藥的病人而言，使動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)檢測(cè)耐藥基因稱(chēng)為可能。項(xiàng)目階段:試驗(yàn)階段效益分析:與目前存在的基因突變檢測(cè)技術(shù)相比，本項(xiàng)目研究采用的基因突變檢測(cè)技術(shù)具有更高的靈敏度和特異性，靈敏度可達(dá)到0.1％，即可在大于103個(gè)野生型基因的背景下檢測(cè)到一個(gè)突變基因。本項(xiàng)目研究已在基因突變檢測(cè)方面積累了一定經(jīng)驗(yàn)，已完成了對(duì)EGFR和K-ras基因檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室研發(fā)工作，前期的研究結(jié)果顯示，采用本項(xiàng)目的技術(shù)方法檢測(cè)EGFR 29種常見(jiàn)突變和K-ras基因8種常見(jiàn)的突變至少可達(dá)到0.1%的檢測(cè)選擇性，具有高度的靈敏度和特異性，并且可在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)8種類(lèi)型K-ras點(diǎn)突變，這是目前其他ARMS技術(shù)所無(wú)法達(dá)到的。并且采用本項(xiàng)目技術(shù)，我們進(jìn)一步研發(fā)了針對(duì)肺癌和結(jié)直腸癌靶向治療的EGFR C797S、braf、PIK3CA等突變檢測(cè)的試劑盒，其中EGFR C797S突變檢測(cè)試劑盒目前尚無(wú)上市產(chǎn)品，C797S為靶向藥物治療過(guò)程中產(chǎn)生的突變，可用于靶向藥物的耐藥監(jiān)測(cè)，以便及時(shí)指導(dǎo)病人改變治療方案。

鹽堿地是影響我國(guó)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)的主要因素之一。近年來(lái)植物分子生物學(xué)研究表明，植物中存在耐鹽（抗鹽）基因，如果能將耐鹽基因克隆，然后通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化導(dǎo)入目標(biāo)植物，可以有效提高目標(biāo)植物的耐鹽性。我們從植物中克隆到了耐鹽相關(guān)基因，目前的研究工作正在將耐鹽基因?qū)肽敛莅ㄜ俎！倜}根等植物中，已得到大量的遺傳轉(zhuǎn)化植株。

在中國(guó)癌癥發(fā)病率和死亡率呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì)，癌癥的治療效果不令人滿(mǎn)意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見(jiàn)效快的特點(diǎn)，在臨床已表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢(shì)，能顯著改善患者的生存質(zhì)量和延長(zhǎng)患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應(yīng)用面臨兩個(gè)主要問(wèn)題，一是靶向藥物的適用性問(wèn)題，其治療效果與患者的基因突變類(lèi)型密切相關(guān)，需要通過(guò)腫瘤患者的基因突變檢測(cè)來(lái)篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問(wèn)題，一般靶向藥物使用幾個(gè)月即可出現(xiàn)耐藥，可能產(chǎn)生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對(duì)少數(shù)患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測(cè)來(lái)指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化治療，并且在治療過(guò)程中通過(guò)對(duì)耐藥基因的檢測(cè)了解靶向藥物的療效變化進(jìn)一步指導(dǎo)靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時(shí)可避免無(wú)效用藥，節(jié)約社會(huì)成本。顯然采用靶向藥物的個(gè)性化治療方案可使患者受益最多，但受現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實(shí)現(xiàn)。由于目前的基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測(cè)標(biāo)本，但很多晚期癌癥病人不適合手術(shù)治療無(wú)法獲取組織樣本，而細(xì)針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對(duì)于手術(shù)患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監(jiān)測(cè)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)無(wú)樣可取的情況；同時(shí)由于檢測(cè)靈敏度和特異性不夠高，現(xiàn)有技術(shù)只能進(jìn)行單一突變檢測(cè)，不能同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，由于突變種類(lèi)較多，臨床檢測(cè)操作繁瑣，工作量較大。本項(xiàng)目針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的缺點(diǎn)進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測(cè)技術(shù)使基因突變檢測(cè)靈敏度和特異性較現(xiàn)有技術(shù)提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測(cè)對(duì)象，并且可同時(shí)檢測(cè)多種點(diǎn)突變，簡(jiǎn)化了操作流程，節(jié)約了成本。 本項(xiàng)目的目的是開(kāi)發(fā)可以血液和組織樣品為檢測(cè)對(duì)象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測(cè)試劑盒，用于臨床指導(dǎo)靶向藥物的個(gè)性化用藥，并將其推廣應(yīng)用。

本實(shí)用公開(kāi)了一種生物基因提取研磨裝置，包括移動(dòng)件和圓柱形且內(nèi)部中空的下殼體，下殼體的頂端開(kāi)口設(shè)置，所述移動(dòng)件包括圓柱形的研磨塊和軸線處設(shè)有豎直穿孔的圓柱，研磨塊的頂端和豎直桿的底端同軸固定，豎直桿的頂端穿過(guò)圓柱上的豎直穿孔并延伸至圓柱的上方，圓柱側(cè)邊的下部設(shè)有外凸螺紋，圓柱的頂端和豎直桿側(cè)邊通過(guò)連動(dòng)件連接，下殼體內(nèi)壁的中上部開(kāi)設(shè)有內(nèi)陷螺紋，外凸螺紋和內(nèi)陷螺紋相嚙合，研磨塊的直徑和下殼體內(nèi)壁的直徑相

棉花是我省東部沿海地區(qū)最重要的經(jīng)濟(jì)作物。轉(zhuǎn)基因棉花的種植面積近年迅速擴(kuò)大，但是轉(zhuǎn)基因棉籽目前沒(méi)有得到適當(dāng)?shù)拈_(kāi)發(fā)利用。南京工業(yè)大學(xué)對(duì)菜籽棉籽等含油含毒種籽的開(kāi)發(fā)利用研究已經(jīng)有

通過(guò)基因分析以及細(xì)胞和斑馬魚(yú)模型實(shí)驗(yàn)，證實(shí)DDX24基因突變導(dǎo)致了該家族患者的內(nèi)臟血管畸形，并將其命名為多器官靜脈淋巴管畸形綜合征。后續(xù)通過(guò)基因診斷和靶向治療，該家族兩名本已病入膏肓的患者目前臨床癥狀得到明顯改善。       除以上發(fā)現(xiàn)外，依托大科研平臺(tái)優(yōu)勢(shì)以及大學(xué)附屬醫(yī)院豐富的臨床資源，單鴻教授團(tuán)隊(duì)還收集了近500例散發(fā)病例進(jìn)行深入研究并揭示：DDX24突變不僅限于上述家系的患者中，還存在于具有相似畸形血管表型的散發(fā)病例中，且檢出率高達(dá)17%，提示該基因在血管畸形中的重要作用。       血管畸形發(fā)病率高，絕大部分發(fā)病機(jī)制不明，診斷和治療均存在很大困難；尤其是內(nèi)臟血管畸形，由于發(fā)病部位隱匿，主要依賴(lài)MRI、CT等影像檢查發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)病人就診時(shí)已發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥。       血管畸形致病基因DDX24的發(fā)現(xiàn)為臨床研究提供了新方向，有望成為血管畸形新的診斷依據(jù)和治療靶點(diǎn)。

利用全基因組芯片對(duì)52對(duì)驅(qū)動(dòng)基因陰性肺腺癌腫瘤組織和相鄰正常組織進(jìn)行候選基因的篩選，通過(guò)KEGG信號(hào)通路富集分析發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路在驅(qū)動(dòng)基因陰性肺腺癌中高度激活，并得到41個(gè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)的差異表達(dá)基因。在實(shí)驗(yàn)階段，課題組運(yùn)用組織芯片技術(shù)(TMAs)和LASSO Cox回歸分析進(jìn)一步對(duì)41個(gè)候選基因進(jìn)行篩選，最終構(gòu)建了一個(gè)由CTNNB1、SOX9、DVL3和Wnt2b組成的預(yù)后相關(guān)classifier（CSDW）。依據(jù)CSDW classifier,驅(qū)動(dòng)基因陰性肺腺癌患者可被分為高風(fēng)險(xiǎn)組和低風(fēng)險(xiǎn)組，并且高風(fēng)險(xiǎn)患者的總生存率顯著差于低風(fēng)險(xiǎn)患者（[HR]10.42,6.46-16.79;p<0.001）。在驗(yàn)證階段，課題組收集了內(nèi)部驗(yàn)證組樣本和兩個(gè)獨(dú)立的外部驗(yàn)證組樣本。經(jīng)過(guò)驗(yàn)證分析，CSDW classifier被證實(shí)可作為預(yù)測(cè)驅(qū)動(dòng)基因陰性肺腺癌患者預(yù)后的可靠工具，同時(shí)為驅(qū)動(dòng)基因陰性肺腺癌的治療提供新的靶點(diǎn)。