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納米金由于具有獨特的光學性質和表面生物分子偶聯能力以及新發現的模擬酶功能，而在生物醫學檢測中有重要的應用價值。將特異性抗體偶聯在金納米顆粒上構建納米探針，可以特異地標記腫瘤細胞，一方面可以利用其模擬酶特性進行顯色和顯微鏡讀片，用來有效替代傳統的天然酶標記顯色技術；另一方面，可以利用納米金暗場成像的功能，通過暗場顯微鏡讀片，從而省略了酶底物顯色的步驟和成本，同時可以突破前一種技術只能定性判讀的局限性，實現基于暗場光散射圖像分析的定量檢測，使得定量免疫組化檢測成為可能。經過多年研發與攻關，我們已經成功實現針對惡性淋巴瘤的特異標記及雙模式檢測（模擬酶明場顯色和暗場成像）技術建立，實現針對臨床乳腺癌Her2檢測的模擬酶增強暗場免疫組化定量判讀，建立了定量判讀圖像分析軟件，完成臨床病例檢測120例，檢測靈敏性優于95%，特異性優于90%，對推動臨床定量免疫組化技術及實現更精準的病理診斷具有重要意義。

已有樣品/n成功將全長的西妥昔單抗基因分別克隆至腺病毒載體AdC68和Hu5，構建重組腺病毒AdC68-CEb和Hu5-CEb，通過WesternBlot4證明成功表達了西妥昔單抗；我們進一步通過夾心ELISA對表達的西妥昔單抗進行了定量，產量分別為639g/L和522g/L；同時，我們通過間接免疫熒光證明了所表達的西妥昔單抗與EGFR結合的特異性；并通過MTT實驗證明了AdC68-CEb和Hu5-CEb顯著抑制結直腸癌細胞的生長，而對正常細胞沒有抑制作用；動物實驗顯示，用AdC68-CEb和Hu5

發熱伴血小板減少綜合征（Severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS）是一種由新型布尼亞病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV）引起的急性傳染病。在研究過程中發現，針對GN包膜蛋白的抗體能阻止SFTSV感染細胞，具有中和活性。故推測，檢測針對GN抗體的ELISA試劑盒將能顯示體內保護抗體的水平，能更好的輔助臨床診斷和治療SFTSV病毒感染。本項目從GN

1 成果簡介本項成果針對目前全球共同關心的腫瘤、傳染病、內分泌等重大疾病快速檢測問題，建立相關疾病診斷所需的高靈敏度化學發光免疫分析新方法，研制了一系列可用于臨床分析的化學發光免疫分析試劑盒。 所建立的方法操作簡單，線性范圍寬，成本低，可以實現大規模的樣品調查和篩選。本項成果包括基于磁顆粒的多種標志物的快速聯合檢測技術，研制高通量、 快速臨床診斷試劑盒和全自動化學發光免疫分析儀的關鍵裝置。可以實現腫瘤、傳染病、內分泌等系列化學發光免疫分析試劑的產業化。研究成果已部分應用于臨床檢驗。2 應用說明微板式磁化學發光酶免疫分析（ MMCLEIA）方法。以磁性微粒子為載體，采用磁性微粒子表面包被技術和免疫反應的特點，以磁性酶免疫測量分析為模型，建立了微板式磁化學發光酶免疫分析法。能夠較好地應用于血清以及尿液中不同生物標記物成分的分析。 用改良的戊二醛交聯法完成堿性磷酸酶（ ALP） 對抗體的標記，所得酶結合物保持了單克隆抗體的免疫反應性和酶的催化活性。 采用 4-甲氧基-4-（ 3"-磷酰氧基苯） -螺旋-（ 1， 2-二氧雜環丁烷-3， 2'-金剛烷（ AMPPD） -堿性磷酸酶（ ALP） 化學發光體系，并以異硫氰酸熒光素（ FITC） 和 ALP 分別標記疾病標記物的單克隆抗體。在溶液中形成 FITC 標記抗體-抗原-ALP 標記抗體的免疫夾心復合物后，引入偶聯 FITC 抗體的微米級磁性微粒子作為反應體系的分散固相，并最終形成雙夾心免疫復合物。在反復施加磁場的作用下，通過洗滌將沒有結合的游離蛋白與免疫復合物分離，實現對待測抗原的測定。 這一技術可以應用于腫瘤標記物的檢測。3 效益分析化學發光免疫分析由于其高靈敏度、快速、高通量等特點，可以應用于生物樣品的快速檢測，在臨床檢測、環境分析以及食品安全分析等領域一直受到人們的重視。本研究成果及專利技術均從實際需要出發，不需要繁雜的樣品前處理，就可以更方便地檢測出人體或者環境生物樣品中相關物質的含量，這種技術可以用于日常生產和生活中，對人類和動物的身體健康、維持全球生態平衡等方面具有很大的意義。微板式磁性微粒子化學發光免疫分析新技術的開發不僅為腫瘤、傳染病等重大疾病診斷與預防提供強有力的檢測工具，對于發展其他疾病診斷技術和環境雌激素類化合物的檢測也將起到重要作用。因此化學發光免疫分析技術的發展拓寬了免疫分析的應用領域，具有廣闊的市場前景和非常可觀的經濟效益。4 合作方式技術轉讓或合作開發， 商談。5 所屬行業領域醫療衛生。

了肝臟特異性的小分子非編碼核糖核酸microRNA-122在肝細胞抗病毒天然免疫中的重要作用，并揭示microRNA-122通過抑制RTK/STAT3信號通路賦予肝細胞強有力天然免疫功能的核心機制。 在肝癌細胞HepG2中導入microRNA-122可以極其顯著地增強細胞應對各種病毒核酸（包括HCV和HBV）的天然免疫反應。研究發現microRNA-122可以直接靶向多種受體酪氨酸激酶（RTK），從而降低了HepG2細胞中STAT3的酪氨酸磷酸化水平。更有趣的是，他們發現STAT3可以直接抑制干擾素調節因子IRF1的表達，STAT3酸磷酸化水平的下調解除了STAT3對干擾素轉錄激活的抑制，從而使得干擾素信號通路在病原體入侵時能迅猛激活。該研究揭示了在肝細胞中miR-122–RTKs/STAT3–IRF1–IFNs通路調控干擾素表達的重要途徑，闡明了微RNA對肝細胞等非免疫細胞天然免疫能力調控的新機制。       成熟肝細胞中microRNA-122表達量極其豐富，因此在遇到病毒侵害時可迅速啟動天然免疫應答，這種強健的天然免疫能力對于肝細胞是必不可少的，一旦肝細胞中microRNA-122含量不足（比如，病毒感染引起的炎癥可導致microRNA-122表達下調），就會導致肝細胞天然免疫能力大幅下降，更容易被病毒入侵。以上這些發現對于病毒慢性感染引起的肝臟疾病，特別是癌癥的治療具有重要指導意義。

利用現代分子生物學方法對傳統抗血清制備技術進行改造，突破 了過去抗血清生產經驗為主造成的不確定性和不系統性，提高了抗血 清制備的技術含量和生產效率。有效去除抗血清中的非特異性抗體， 從而實現抗體制備的標準化和規模化生產，同時也降低了生產成本。 免疫磁珠分離技術的最突出的優點是特異性強，可以明顯提高檢 測的靈敏性，縮短病原體的檢測時間一至數天，并且可從復雜的樣品 中直接分離病原體，降低標本中抑制物的干擾，提高靈敏度。 已生產出 3 種診斷血清產品，包括“致病性大腸桿菌 O 抗原診 斷血清試劑盒”、“大腸桿菌 H 抗原全套診斷血清試劑盒”和“志賀氏菌 O 抗原全套診斷血清試劑盒”，共計 147 種高特異性抗體。 經中 國 CDC 使用證實，該血清具有反應速度快、特異性強的特點，與日 本生研同類血清質量相當，遠優于國內同類產品。 繼續在市場調研的基礎上，再進行 11 種改類試劑盒的研發和生 產，填補國內外市場空白。 本項目完成后，實施單位將可生產 12 種診斷血清試劑盒（包括 前期已完成開發的 3 種），按每個疾控中心每年需求每種試劑盒一套 計算，總需求量約 1200 套。此外，進出口檢驗檢疫單位對某些種類 的血清亦有一定需求，約為 300 套。按每套試劑盒平均 1 萬元的售價 計算，每年的市場可達 1500 萬元。 免疫磁珠分離試劑盒可廣泛應用于臨床檢驗，食品檢驗，水質／ 環境檢驗，獸藥檢驗等，市場非常之大，現主要的生產商為國外的 Dynal 和 Matrix 公司，以 Dynal 公司為例，其每年可創造數十億美元 的銷售額。由于依賴進口，國內多家疾病預防控制和出入境檢驗檢疫 單位已經向項目實施單位提出了產品的開發意向。該產品研發成本約 為每毫升 600 元，銷售價格在每毫升 2000 元左右，顯示了良好的市 場前景。

已有樣品/n目前在臨床上，兩種PD-1單抗的使用劑量為2-3mg/kg，每2-3周靜脈輸入，歷時30-60分鐘。使用劑量大且頻繁。同時，單克隆抗體的制備、純化過程繁瑣，要求嚴格，導致單抗的價格昂貴，使受益于該單抗的病人在接受治療時受到極大限制。由于腺病毒制備、純化簡單、產量高、安全性好、外源表達時間長等特點，因此我們研發的腺病毒表達PD-1單抗制備簡單、成本低、療效好、使用方便，可充分滿足臨床病人的需求。我們研發的重組腺病毒載體表達PD-1單抗為臨床相關腫瘤的治療與研究提供了一種有效的新手段，并具有