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研發階段/n一種利用甲殼廢棄物制備甲殼素Ｌ－乳酸鈣和復合氨基酸或肽的方法　　本發明涉及一種通過微生物發酵蝦蟹等甲殼廢棄物制備甲殼素、Ｌ－乳酸鈣和復合氨基酸或肽的方法，具體為甲殼廢棄物在鼠李糖乳桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ?ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＣＩＣＣ６００３和枯草芽孢桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＣＩＣＣ２３５７９種子液中發酵后獲得Ｌ－乳酸鈣，然后在米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ?ｏｒｙｚａｅ）ＣＩＣＣ４１４７７種子液中發酵后獲得復合氨基酸或肽和甲殼素。本發明的方法可以實現蝦蟹等甲殼

(R)-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯用于合成多種血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)普利藥物，如貝 那普利、西拉普利等，該類藥物用于治療高血壓。在抗高血壓藥物市場中，ACEI與非肽類血 管緊張素II (AngII)受體抑制劑、鈣通道拮抗劑(CCB)形成了三足鼎立的市場格局。該類藥物 2009年的世界銷售為52億美元，國內市場約30億元人民幣，國內外對普利原料藥需求旺盛，價 格穩定，尤其是貝那普利等緊俏產品，主要依賴進口，國內外前景樂觀。目前，我國在卡托普 利、依那普利、賴諾普利、雷米普利、喹那普利、貝那普利和福辛普利等8個普利藥物實現了 產業化。傳統的生產(R)-HPBE的方法為化學法，存在催化劑較昂貴且污染環境、產物光學活 性低、對設備壓力要求高等缺點，本項目采用的生物法，綠色無污染，催化劑成本低，產物光 學活性高，操作簡單，條件溫和，具有很好的市場前景。 本項目開發了一種酶促不對稱還原2-氧代-4-苯基丁酸乙酯制備多種普利類藥物關鍵手性 中間體(R)-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯的生物技術。該技術易于放大，反應溫和(30℃，pH 6.0)，產 品光學純度高(>99%)，收率85%，且不需要添加昂貴的輔酶再生系統。項目的實施將節能減排 20-30%，生產成本降低20%以上，產品收率提高15%，顯示了該項技術具有很好的工業應用前 景

該專利首次公開了三種偏甘油酯脂肪酶突變體及其制備方法,解決了偏甘油酯脂肪酶在實際生產及應用中所存在熱穩定性差的國際性技術難題。專利技術在廣東溢多利生物科技股份有限公司實施生產，開發形成系列濃縮復合酶產品，成功用于養殖、食品及造紙等行業中，成功出口東南亞、南亞、南北美洲、東歐和韓國、中國臺灣、澳洲等多個“一帶一路“沿線國家及地區，并被當地用戶所普遍接受和認可。截至2017年12月，所開發的產品累計為企業帶來銷售額接近1.8億元，利稅近2700萬元。獲得了中國專利優秀獎和廣東專利金獎。

一步酶法從頭孢菌素 c（CPC） 生產 7－氨基頭孢烷酸（ 7-ACA） 是繼我們研發的兩步酶法工藝成功應用于工1 成果簡介一步酶法從頭孢菌素 c（CPC） 生產 7－氨基頭孢烷酸（ 7-ACA） 是繼我們研發的兩步酶法工藝成功應用于工業生產以后，在生產頭孢菌素類抗生素醫藥中間體技術的又一個突破。與化學法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單、環保和轉化率高、產品質量好等優點。該技術采用基因工程技術對 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因進行了改造，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因。通過我們自己構建的高效啟動子 HP 以及優化組合的調控表達元件，構建并篩選出了能夠高效、高活性表達一步酶法用酶——CPC ?；傅幕蚬こ碳毎?。這是國內第一個使得 CPC ?；富钚阅軌蜻_到工業應用水平的技術。由于采用了高效的表達系統和穩定的質粒，以及組成型表達結構，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩定，在發酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導劑就可以實現高效、高活性表達。在高效表達 CPC ?；傅幕A上，我們通過在表達基因上同時引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進行。通過自己開發研制的可重復使用的固定化載體，可以使得固定化酶活性達到 60U/g 以上。 采用我們研制的特異性純化介質，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC ?；福甘章试?90 ％以上，固定化酶活達到 60U/g 以上。固定化酶可以重復使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復使用。2 技術指標菌 種：基因工程大腸桿菌，卡那抗性，組成型表達。 發酵溫度： 37℃ 培 養 基：普通的大腸桿菌培養基，主要成分有玉米漿等廉價的營養源。 發酵周期： 20 小時 發酵酶活： 3U/ml 以上（ 5 升發酵罐） 特 點：遺傳特性穩定，不需要添加誘導劑和抗生素，工藝簡單。3 合作方式小試技術轉讓或合作進行中試。4 所屬行業領域醫療衛生。業生產以后，在生產頭孢菌素類抗生素醫藥中間體技術的又一個突破。與化學法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單、環保和轉化率高、產品質量好等優點。該技術采用基因工程技術對 CPC ?；福ㄒ徊矫阜ㄓ妹福┑幕蜻M行了改造，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因。通過我們自己構建的高效啟動子 HP 以及優化組合的調控表達元件，構建并篩選出了能夠高效、高活性表達一步酶法用酶——CPC ?；傅幕蚬こ碳毎?。這是國內第一個使得 CPC 酰化酶活性能夠達到工業應用水平的技術。由于采用了高效的表達系統和穩定的質粒，以及組成型表達結構，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩定，在發酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導劑就可以實現高效、高活性表達。在高效表達 CPC ?；傅幕A上，我們通過在表達基因上同時引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進行。通過自己開發研制的可重復使用的固定化載體，可以使得固定化酶活性達到 60U/g 以上。 采用我們研制的特異性純化介質，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC ?；?，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活達到 60U/g 以上。固定化酶可以重復使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復使用。

一步酶法從頭孢菌素c（ CPC） 生產7－氨基頭孢烷酸（7-ACA） 是繼我們研發的兩步酶法工藝成功應用于工業生產以后，在生產頭孢菌素類抗生素醫藥中間體技術的又一個突破。與化學法和兩步酶法相比，一步酶法有工藝簡單、環保和轉化率高、產品質量好等優點。該技術采用基因工程技術對 CPC 酰化酶（一步酶法用酶）的基因進行了改造，獲得了能夠高效催化 CPC 到 7-ACA 的突變基因。通過我們自己構建的高效啟動子 HP 以及優化組合的調控表達元件，構建并篩選出了能夠高效、高活性表達一步酶法用酶——CPC 酰化酶的基因工程細胞株。這是國內第一個使得 CPC ?；富钚阅軌蜻_到工業應用水平的技術。由于采用了高效的表達系統和穩定的質粒，以及組成型表達結構，使得該基因工程菌遺傳特性非常穩定，在發酵制酶的過程中不需要添加任何抗生素和誘導劑就可以實現高效、高活性表達。在高效表達 CPC 酰化酶的基礎上，我們通過在表達基因上同時引入的特殊基因序列，使得蛋白的純化和固定化工藝一步進行。通過自己開發研制的可重復使用的固定化載體，可以使得固定化酶活性達到 60U/g 以上。 采用我們研制的特異性純化介質，可以從菌體破碎液中一步純化和固定化 CPC ?；?，酶收率在 90 ％以上，固定化酶活達到 60U/g 以上。固定化酶可以重復使用 20 批以上，純化和固定化用載體可以重復使用。

(R)-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯用于合成多種血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)普利藥物，如貝 那普利、西拉普利等，該類藥物用于治療高血壓。在抗高血壓藥物市場中，ACEI與非肽類血 管緊張素II (AngII)受體抑制劑、鈣通道拮抗劑(CCB)形成了三足鼎立的市場格局。該類藥物 2009年的世界銷售為52億美元，國內市場約30億元人民幣，國內外對普利原料藥需求旺盛，價 格穩定，尤其是貝那普利等緊俏產品，主要依賴進口，國內外前景樂觀。目前，我國在卡托普 利、依那普利、賴諾普利、雷米普利、喹那普利、貝那普利和福辛普利等8個普利藥物實現了 產業化。傳統的生產(R)-HPBE的方法為化學法，存在催化劑較昂貴且污染環境、產物光學活 性低、對設備壓力要求高等缺點，本項目采用的生物法，綠色無污染，催化劑成本低，產物光 學活性高，操作簡單，條件溫和，具有很好的市場前景。 本項目開發了一種酶促不對稱還原2-氧代-4-苯基丁酸乙酯制備多種普利類藥物關鍵手性 中間體(R)-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯的生物技術。該技術易于放大，反應溫和(30℃，pH 6.0)，產 品光學純度高(>99%)，收率85%，且不需要添加昂貴的輔酶再生系統。項目的實施將節能減排 20-30%，生產成本降低20%以上，產品收率提高15%，顯示了該項技術具有很好的工業應用前 景。

碳納米管-硅太陽能電池將具有優異透明導電性能的碳納米管和高吸光性能的單晶硅完美結合，工藝簡單，備受學術界關注。和目前光伏領域所研究的鈣鈦礦、半導體薄膜、量子點等材料相比，碳納米管-硅電池將傳統硅材料和新型碳納米材料兩者優良的光電性能相結合，有望成為下一代光伏候選技術。和傳統晶體硅電池相比， 該電池省略了制備p-n結的熱擴散工藝，小面積時無需蒸鍍金屬柵格，單壁碳納米管的導電性和載流子遷移率遠遠高于晶體硅，因此具有低成本、高效率的優點。目前， 該領域的典型結構，無論是碳納米管-硅還是石墨烯-硅電池，都存在電池效率仍有待提高、電池面積偏小的問題，距離實際應用還比較遙遠。

本成果屬于石油天然氣、礦山工程等鉆探設備技術領域。在鉆頭體上安裝有偏移角為20°≦α≦90°的轉輪，其中轉輪與固定刀翼上具有不同運動形式的切削齒相復合，形成具有交叉刮切特性的PDC鉆頭破巖工具。其有益效果包括： （1）在井底巖石上形成了兩套切削軌跡，其效果是在井底形成網狀破碎區域，有利于切削齒對巖石的有效吃入，有利于巖石的破碎，能顯著提高鉆頭的破巖效率。 （2）轉輪上的切削齒交替工作，減少或避免了固定切削齒鉆頭因少數切削齒失效帶來的鉆頭早期失效，延長了鉆頭使用壽命。 （3）以切削方式破巖的復合式鉆頭鉆進時所需的鉆壓小，軸承所受載荷小，且載荷波動幅度低；鉆頭的輪體速比低，故軸承相對轉動緩慢、發熱少。

成果描述：項目針對豬雞病原菌耐藥性導致細菌病難防控、用藥量大、產品藥殘的關鍵技術難題，取得了重大理論和方法創新成果。 項目揭示了我國近12年豬雞病原細菌耐藥性變化規律，建立菌種庫和耐藥數據庫，創立了5種細菌耐藥基因分子檢測新方法；改進了7種動物專用抗生素及其制劑的生產工藝和質量；創制了非生素免疫增強劑4種。獲國家2類新獸證書6個，3類2個。獲國家發明專利12項，實用新型專利1項。主編參編專著6部，發表論文123篇，包括本專業權威SCI論文AAC(IF:4.672)，JAC(IF:4.659)等35篇。成果應用使豬雞抗生素用量減少30%-70%，細菌病降低50%，節省用藥成本30%，為有效控制豬雞細菌感染及耐藥，減少抗生素使用，保障公共衛生和食品安全提供了新的理論和技術。市場前景分析：應用領域：本項目的應用領域主要為獸藥、疫苗生產企業以及大中型豬雞養殖生產企業。可共同企業合作開發新型獸藥、生物制品等，同時也可為大中型豬雞養殖生產企業提供技術支撐，有效降低抗生素的使用，保障產品安全，打造高品質放心品牌。市場需求：豬雞細菌性疾病嚴重危害公共衛生和食品安全，如豬鏈球菌、豬雞沙門氏菌引起人感染發病的公共衛生事件。在規?；B殖條件下，細菌性疾病呈多發趨勢如大腸桿菌等，畜禽因細菌性疾病致死或生產性能下降等造成全國年直接經濟損失400億元（畜牧業年鑒2010）。病原細菌產生耐藥性是致細菌疾病難控治、用藥量大（每年畜禽抗生素原料藥用量多達10萬噸）、產品藥殘高的關鍵技術難題，如近年來出現耐多種抗生素的結核桿菌、金黃葡萄球菌、大腸桿菌等“超級耐藥菌”，引起了極大關注。本項目通過產學研結合12年聯合攻關，創立了細菌耐藥基因的分子檢測新方法，揭示了細菌耐藥性變化規律，創新了耐藥性控制理論和應用技術，并在安全高效新獸藥研發中得到廣泛應用（圖1），可為保障我國豬雞養殖健康、公共衛生和產品安全提供了有力的科技支撐，其市場需求極大。與同類成果相比的優勢分析：“該項目已在國內多個省市規?；i場，雞場、示范區、飼料廠、獸藥廠等進行了推廣應用，成果應用效益顯著。研究成果豐富了病原菌耐藥基因的基礎理論研究，為病原菌的耐藥性分子檢測和監測提供了新的技術手段，項目選題技術路線合理，研究手段先進，數據可靠，結果可信，具有先進性、創新性和實用性的特點。其成果總體水平居國內領先、國際先進，部分成果處于國際領先水平”。

本技術成果研發了一種微波輔助提取-高速逆流色譜聯用方法及其裝置。首先采用微波輔助提取模式 本技術成果研發了一種適于裝載分子印跡攪拌棒的解吸池，包括一上部池體及一下部池體。上部池體 提取物料；然后提取液濃縮預分離；最后通過高速逆流色譜純化制備得到目標組分或分析天然產物提取液 的底部連接于下部池體的頂部且兩者內部形成一上下貫通的解吸腔，上部池體頂部設有一液流出口，下部 中的目標組分；上述步驟通過接口及轉換控制實現微波輔助提取、分離、純化、高速逆流色譜制備或分析 池體下部圓周對稱地均布有三個液流入口，液流出口及液流入口與所述解吸腔連通；還包括一分子印跡攪 于一體，可直接從天然產物中提取得到毫克級高純度對照品，具有快速高效、高選擇性的特點，實現天然 拌棒，放置于所述解吸腔中；還包括一密封圈，密封所述上部池體及下部池體的連接部。上述解吸池配以 產物快速高效的在線提取分離、純化制備或分析?！疤烊晃镔|提取分離純化的實驗室制備微波裝置”集微 微量注射泵可實現對分子印跡攪拌棒的高效流動加熱解吸。另外在該解吸池的基礎上，通過與高效液相色 波輔助提取快速高效分離的優勢和高速逆流色譜高效純化、制備