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項目成果/簡介:在中國癌癥發病率和死亡率呈持續增長趨勢，癌癥的治療效果不令人滿意。腫瘤靶向藥物是癌癥治療的新希望，具有方便、見效快的特點，在臨床已表現出較大的優勢，能顯著改善患者的生存質量和延長患者的生存期，是癌癥治療的首先藥物，但靶向藥物的應用面臨兩個主要問題，一是靶向藥物的適用性問題，其治療效果與患者的基因突變類型密切相關，需要通過腫瘤患者的基因突變檢測來篩選適用患者；二是靶向藥物的耐藥問題，一般靶向藥物使用幾個月即可出現耐藥，可能產生新的耐藥基因。因此盲目使用靶向藥物，可能只對少數患者有效，治療效果很差，而如果采用基因突變檢測來指導靶向藥物的個性化治療，并且在治療過程中通過對耐藥基因的檢測了解靶向藥物的療效變化進一步指導靶向用藥，則患者的治療效果可明顯改善，同時可避免無效用藥，節約社會成本。顯然采用靶向藥物的個性化治療方案可使患者受益最多，但受現有技術檢測靈敏度和特異性的限制該方案目前還難以實現。由于目前的基因突變檢測靈敏度和特異性不夠高，大都以腫瘤組織為檢測標本，但很多晚期癌癥病人不適合手術治療無法獲取組織樣本，而細針穿刺等方法取樣較痛苦，患者往往難以接受，另外，對于手術患者腫瘤組織樣本難以再次取樣獲得，因此治療監測過程中會出現無樣可取的情況；同時由于檢測靈敏度和特異性不夠高，現有技術只能進行單一突變檢測，不能同時檢測多種點突變，由于突變種類較多，臨床檢測操作繁瑣，工作量較大。本項目針對現有檢測技術的缺點進行技術創新，采用特殊的TB-ARMS基因突變檢測技術使基因突變檢測靈敏度和特異性較現有技術提高十倍以上，從而可以血液樣品為檢測對象，并且可同時檢測多種點突變，簡化了操作流程，節約了成本。 本項目的目的是開發可以血液和組織樣品為檢測對象的高靈敏度和特異性的基因突變檢測試劑盒，用于臨床指導靶向藥物的個性化用藥，并將其推廣應用。應用范圍:與目前存在的基因突變檢測技術相比，本項目所采用的檢測技術具有更廣泛的適用性。本項目所采用的技術以病人血液為主要檢測標本，可適用于所有肺癌和結直腸癌病人。由于具有高度的靈敏度和特異性，可在高野生型基因背景下進行檢測，解除了傳統檢測技術對病人標本的限制。血液標本采樣簡單方便，與手術穿刺相比，極大的減輕了病人痛苦，也降低了取樣的成本，更容易得到病人的配合。對于繼發性耐藥的病人而言，使動態實時檢測耐藥基因稱為可能。項目階段:試驗階段效益分析:與目前存在的基因突變檢測技術相比，本項目研究采用的基因突變檢測技術具有更高的靈敏度和特異性，靈敏度可達到0.1％，即可在大于103個野生型基因的背景下檢測到一個突變基因。本項目研究已在基因突變檢測方面積累了一定經驗，已完成了對EGFR和K-ras基因檢測的實驗室研發工作，前期的研究結果顯示，采用本項目的技術方法檢測EGFR 29種常見突變和K-ras基因8種常見的突變至少可達到0.1%的檢測選擇性，具有高度的靈敏度和特異性，并且可在同一反應中同時檢測8種類型K-ras點突變，這是目前其他ARMS技術所無法達到的。并且采用本項目技術，我們進一步研發了針對肺癌和結直腸癌靶向治療的EGFR C797S、braf、PIK3CA等突變檢測的試劑盒，其中EGFR C797S突變檢測試劑盒目前尚無上市產品，C797S為靶向藥物治療過程中產生的突變，可用于靶向藥物的耐藥監測，以便及時指導病人改變治療方案。