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本發明公開了一種糖基硫醇及金諾芬的合成方法。所述糖基硫醇的合成方法，包括以下步驟：(1)將硫乙酰基保護的糖、硫醇以及弱堿溶于有機溶劑中，獲得原料混合液；(2)將原料混合液室溫下反應 1小時至 24 小時，將反應產物萃取純化即獲得糖基硫醇。所述金諾芬的合成方法，包括以下步驟：A、將 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基硫醇和三乙基磷氯化金溶解于有機溶劑中，冰浴加入堿金屬弱酸鹽的水溶液，持續攪拌獲得反應液；B、反應液在室溫下發生親核取代反應，得到反應粗產物，萃取純化后得到金諾芬純品。本發

其他成果/n一種復合物理場協同強化菜籽蛋白糖基化改性的方法，包括如下步驟：1)菜籽蛋白的制備；2)菜籽蛋白溶液的配制；3)蛋白質?糖混合溶液的配制；4)微波?超聲波復合物理場協同處理；5)離心分離；6)透析與干燥。其中，步驟3)中，微波的功率為200～500W，超聲波的功率為100～300W，反應體系的溫度為60～70℃，反應時間為6～10min。本發明利用微波快速加熱效應和超聲波的機械攪拌與加速擴散作用，可避免反應體系出現局部高溫現象，使糖基化反應更為均勻；同時微波的電磁場與超聲波的空穴作用會在反應體系中形成超臨界高溫與高壓的微環境及界面濃縮現象，從而避免傳統濕熱法下由于長時間持續高溫作用而產生褐變物質，消除了色澤對產品的影響。

 通過解析蛋白脫底物及其與配體、DNA等一系列晶體結構（圖a-c），該研究揭示了MsmUdgX獨特的催化過程。研究發現，MsmUdgX首先對含U底物的 DNA發生尿嘧啶切除作用，然后其第109位的組氨酸與單鏈DNA底物AP位點的糖環形成一個共價鍵，因此可以耐受變性劑的作用；同時也由于酶無法再生，從而失去其固有的尿嘧啶酶切活性。該研究共解析了五套 MsmUdgX 的晶體結構，各自代表其催化途徑中不同階段酶所處的狀態，提出了如圖e所示的催化路徑模型，可能經歷一個稱為“oxacarbenium”的中間體。該機制不但合理解釋了MsmUdgX酶獨特的生化性質，而且發現酶在反應中通過一種“自殺”的方式抑制其自身活性，在已知的UDG酶中尚屬首例。此外，由于MsmUdgX只存在于細菌中，研究者的MsmUdgX-DNA共價復合物的結構可能為新型抗菌藥物的設計提供新思路，具有潛在的應用前景。

糖基化修飾是一種廣泛存在且重要的蛋白質翻譯后修飾，由糖基轉移酶催化形成。抗體、疫苗等許多臨床治療性蛋白質都具有特異性糖基化修飾，且對蛋白活性至關重要。基于糖基轉移酶的化學酶法合成方法，是獲得均一糖蛋白的有效手段之一。因此，找尋性質優良的各種糖基轉移酶十分關鍵。對比真核細胞，細菌來源的糖基轉移酶具有易表達純化和催化產率高等優良性質，常被改造為人工合成糖蛋白的工具酶。然而，蛋白O-連接糖基化修飾在原核生物與真核生物之間并不保守，這成為了利用細菌糖基化系統生產真核生物O-糖蛋白的一大瓶頸。為了解決這個問題，陳興教授課題組對病原菌-宿主相互作用中的蛋白質糖基化進行了探索。   某些病原菌入侵宿主細胞后，會分泌具有糖基轉移酶活性的效應蛋白。這些效應蛋白往往利用宿主的糖供體，并且修飾宿主的靶蛋白。因此，對這類糖基轉移酶的工程化，可為實現真核生物O-糖蛋白的合成提供新的有效策略。嗜肺軍團菌效應蛋白SetA具有O-葡萄糖轉移酶活性，然而其底物蛋白尚未被鑒定。 本研究首先開發了能夠實現特異性標記和選擇性富集的化學酶法策略。他們設計被SetA利用的生物正交基團修飾的糖供體（尿苷二磷酸-6-疊氮-葡萄糖，UDP-6AzGlc），將疊氮葡萄糖6AzGlc轉移至底物蛋白。通過點擊化學反應，與可切割生物素探針連接，實現對底物蛋白的選擇性富集和位點特異性質譜鑒定(下圖)。質譜分析鑒定到分布于276個蛋白的317個O-glucose修飾位點。天然糖供體標記及軍團菌侵染實驗，驗證了SetA可以修飾眾多的底物蛋白。

隨著環境保護和可持續發展的呼聲日益高漲， 以天然可再生資源開發生產綠色環保、性能優良的表面活性劑 已成為當代潮流。我國淀粉資源豐富，利用淀粉水解物——葡 萄糖為原料，開發環保高效的表面活性劑具有很高的應用價值。 本項目在前期研究基礎上，設計開發一類新型的基于葡萄糖的 酯基季銨鹽陽離子表面活性劑，可應用于日用化工、農用化學 品、織物柔軟劑、皮革化工、造紙、礦物浮選、油田、涂料和 黏合劑等多個領域。

經典的"H—L—M"效應("哈伯格一勞爾森一梅茨勒"效應)已經被各國經濟學者探究了半個多世紀,但截止到目前,還沒有文獻基于Becker—Mulligan(1997)的貼現偏好進行理論分析,并且目前所有的研究均是考慮政府使用資源的確定性狀態.對此,本文基于Becker—Mulligan(1997)的貼現因子討論是否存在"H—L—M"效應,并比較了政府不同財政運轉效率的結果.研究發現:在Becker-Mulligan(1997)貼現偏好下,貿易條件惡化將會導致經常賬戶出現盈余;而貿易條件惡化時,政府財政運轉效率對于經常賬戶的重新平衡具有"加速"作用.

本發明公開了一種具有非對稱結構的殼聚糖基仿生膜材料的制備方法，步驟包括：將殼聚糖分散于醋酸水溶液中，待完全溶解后，加入無水甲醇和乙酸酐反應，之后離心去除沉淀物；在攪拌條件下滴入堿性凝固液，過濾得到殼聚糖微凝膠；將上述微凝膠加入丙三醇水溶液中，注入模具，靜置瀝干水分，一部分凍干得到殼聚糖基多孔海綿材料，另一部分烘干得到殼聚糖基致密膜材料；將兩者用生物膠粘合，得到具有非對稱結構的殼聚糖基仿生膜材料。本發明制備工藝簡單，制備的殼聚糖基膜材料兼具多孔海綿結構和致密膜結構，遇水不卷曲，具有骨誘導再生性能良好、降解可控等優點，可作為引導骨組織再生膜材料廣泛應用于種植牙、骨關節炎、骨缺損等領域的治療。

1、成果來源、成果被評價及認定（發明專利授權號）等情況 本項目來源于國家“十二五”科技支撐計劃項目“大宗糧食綠色加工技術與 產品”中課題“玉米淀粉加工關鍵技術研究與示范（2012BAD34B07，479 萬元， 研究起止時間：2012.01-2014.12）”和國家自然科學基金“酶法選擇性合成單一 類型環糊精的控制策略研究（31101228，25 萬元，研究起止時間：2012.01- 2014.12）”，屬于農產品深加工科學技術領域。本項目累計申請發明專利 7 項（1 項獲授權），發表論文 11 篇（8 篇被 SCI 收錄），于 2015 年 7 月通過中國糧油學 會鑒定，獲國際先進評價。 2、主要技術內容、作用、對行業的意義，獲獎情況 CGT 酶生產環糊精最不利的條件之一是產物特異性差，給產物的分離純化 帶來很大不便。同時，CGT 酶存在的另一大缺陷是其熱穩定性較差，由于在環糊 精工業化生產中，底物淀粉首先要經過高溫糊化、液化處理，然后降溫至適當溫 度進行環化反應，若 CGT 酶能夠適應更高的反應溫度，勢必有助于提高反應效率， 因此，有必要改善 CGT 酶的熱穩定性，提高其催化效率，進而有效降低環糊精生20 產成本。本項目主要是通過改善 CGT 酶產物特異性和熱穩定性，提高該酶的使用 性能，將其應用于環糊精的工業化生產中，能顯著降低環糊精的生產成本，促進 環糊精在各個領域的廣泛應用。因此，隨著環糊精在食品、醫藥等領域中的應用 越來越廣闊，開發改善 CGT 酶使用性能的關鍵技術顯得尤為重要，具有很好的推 廣應用前景。 3、成果的技術指標、創新性與先進性 本項目在長期從事淀粉生物轉化研究的基礎上，針對環糊精工業化生產過程 中 CGT 酶的產物特異性和熱穩定性較差問題，通過深入研究和不懈努力，逐步改 善了 CGT 酶的產物特異性和熱穩定性，突破了關鍵技術，并實現了具有理想產物 特異性和熱穩定性的β-CGT 酶突變體在酶法生產β-環糊精中的應用。該酶使用 性能改善易操作，具有很好的應用價值，技術位于國際領先水平。與國內外同類 技術相比，具有以下創新： ①針對 CGT 酶產物特異性較差的問題，確定了 CGT 酶的產物特異性與其一級 結構的相關性，獲得構建具有理想產物特異性的 CGT 酶突變體的簡單可行方法， 為從本質上改善 CGT 酶的產物特異性提供理論基礎； ②針對 CGT 酶熱穩定性較差的問題，采用定點突變技術闡明了重要氨基酸殘 基對 CGT 酶熱穩定性產生影響的規律，獲得了構建具有理想熱穩定性的 CGT 酶突 變體的簡單可行方法，為從根本上改善 CGT 酶的熱穩定性打下了基礎； ③ CGT 酶使用性能的改善方法簡單易行，所得到具有理想產物特異性和熱 穩定性的酶突變體可直接應用于β-環糊精的工業化生產，能提高β-環糊精的得 率，降低β-環糊精的生產成本。 

環糊精在食品、香料、醫藥、農藥、化工等行業有著廣泛的應用。本項目通過基因工程技術構建了高效表達?-CGT 酶工程菌，通過發酵優化，發酵液酶活達到 100 U/ml (以?-環糊精的生成速率計)以上，70400 U/ml (以水解活性計)，具有發酵周期短，工藝簡單易控等特點。發酵結束后發酵液過濾除菌可以直接作 為酶液進行轉化反應。此外，通過蛋白質工程技術改造了酶的產物特異性，當以15%淀粉為底物時，環糊精總轉化率達到 55%以上，其中α-環糊精含量達到 85％以上

研發階段/n本發明提供一種蛋白質分子印跡膜，能夠選擇性識別結合模板蛋白質分子，是以魔芋葡甘聚糖為主要基質，其制備方法是將魔芋葡甘聚糖充分溶脹后，加交聯劑或與其它高分子共混，中和后加入模板蛋白質分子，充分混合后流涎成膜，干燥脫水形成模板蛋白質的分子印跡，加洗脫液充分洗脫模板蛋白質分子后制成魔芋葡甘聚糖蛋白質分子印跡膜。本發明所得蛋白質分子印跡膜，可作為生物分離模擬親和膜應用于蛋白質分離純化，尤其是基因工程蛋白質產品的分離純化，生物傳感檢測中的敏感膜部件以模擬抗體識別相應抗原等。