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一、成果簡介 目前，我國獸用細胞疫苗制備工藝主要使用轉(zhuǎn)瓶進行，培養(yǎng)的細胞密度、抗原低，生產(chǎn)工藝落后，與國際上獸用疫苗生產(chǎn)水平存在較大差距。針對上述疫苗制備過程中存在的技術(shù)瓶頸結(jié)合我國狂犬病的流行情況，該項目使用與中國狂犬病毒街毒同源性最高的中國本土狂犬病疫苗毒株CTN-1株，采用微載體懸浮培養(yǎng)技術(shù)開發(fā)出了具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的狂犬病滅活疫苗。該項目已完成狂犬病毒微載體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)平臺的建立，并以之為基礎(chǔ)研制出鋁佐劑犬狂犬滅活疫苗(商品名：瑞倍爾安)，

“NMT界喬布斯”許越先生推薦創(chuàng)新平臺 中關(guān)村NMT產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟推介成員單位創(chuàng)新產(chǎn)品 “生物安全，人人有責” 推出背景： 在國際競爭白熱化，戰(zhàn)爭形態(tài)多樣化的今天，生物安全已成為國家安全的重要組成部分，為積極應(yīng)對這一挑戰(zhàn)，2019年10月，生物安全法草案于首次提請十三屆全國人大常委會第十四次會議審議。本次新冠肺炎疫情的爆發(fā)，讓各界更加意識到，生物安全對于確保國家安全、保障社會穩(wěn)定、人民群眾生命安全和身體健康的重要性。 國家安全就是國家競爭，歸根結(jié)底又是科技實力的競爭！因此，作為中國的高新技術(shù)企業(yè)，中關(guān)村NMT聯(lián)盟的會員單位，旭月（北京）科技有限公司利用20多年的技術(shù)積累，以NMT：非損傷微測技術(shù)為底層核心技術(shù)，迅速推出了與國家生物安全相關(guān)多種檢驗，監(jiān)測儀器設(shè)備，以及適用于多個學(xué)科及領(lǐng)域的研發(fā)平臺： 《NMT生物安全創(chuàng)新平臺》特制系列產(chǎn)品！ ? 應(yīng)對挑戰(zhàn)： 1）有效性：隨著研究的深入，單細胞的生理狀態(tài)，以及對疫苗的生理反應(yīng)，與處于機體組織器官中的細胞的差異，已逐漸成為研究中的瓶頸。NMT不僅可以檢測單細胞，還可以實現(xiàn)對細胞的原位檢測，以及對活體組織的在體檢測，很好地彌補了這一研究手段的空白。 2）安全性：NMT是用于研究活體材料的生理環(huán)境，其所檢測的Na+、H+、K+、Cl-等與細胞能量代謝、細胞凋亡、細胞形態(tài)維持等生理過程直接相關(guān)。 分類及用途： 1）《抗菌疫苗研究NMT工作站 》（型號：NMT-ABR-100） 基于底層核心NMT技術(shù)，以及成熟的技術(shù)解決方案，讓科研人員可以馬上投入相關(guān)科研創(chuàng)新工作。 ? 2）《抗菌疫苗研究NMT工作站》（型號：NMT-ABR-200） 基于底層核心NMT技術(shù)，結(jié)合自身科研興趣，以及其它相關(guān)技術(shù)參數(shù)，在我方技術(shù)人員協(xié)助下形成技術(shù)解決方案，讓科研人員建立更具獨有創(chuàng)新特色的實驗平臺。 ? 《抗菌疫苗研究NMT工作站》（型號：NMT-ABR-100） 應(yīng)對挑戰(zhàn)： 1）有效性：隨著研究的深入，單細胞的生理狀態(tài)，以及對疫苗的生理反應(yīng)，與處于機體組織器官中的細胞的差異，已逐漸成為研究中的瓶頸。NMT不僅可以檢測單細胞，還可以實現(xiàn)對細胞的原位檢測，以及對活體組織的在體檢測，很好地彌補了這一研究手段的空白。 2）安全性：NMT是用于研究活體材料的生理環(huán)境，其所檢測的Na+、H+、K+、Cl-等與細胞能量代謝、細胞凋亡、細胞形態(tài)維持等生理過程直接相關(guān)。 用途： 基于底層核心NMT技術(shù)，以及成熟的技術(shù)解決方案，讓科研人員可以馬上投入相關(guān)科研創(chuàng)新工作。 ? 參數(shù)： 1.基本功能： 1.1針對抗菌疫苗研究設(shè)計 1.2活體、原位、非損傷檢測 1.3可檢測指標：H+、K+、Ca2+、Cl-、O2 2.性能： 2.1自動化操作 2.2長時間實時和動態(tài)監(jiān)測 2.3無需標記 2.4立體3D流速檢測 3.軟件： 3.1imFluxes智能軟件，可直接檢測、輸出離子分子的濃度與流速 《抗菌疫苗研究NMT工作站》（型號：NMT-ABR-200） 應(yīng)對挑戰(zhàn)： 1）有效性：隨著研究的深入，單細胞的生理狀態(tài)，以及對疫苗的生理反應(yīng)，與處于機體組織器官中的細胞的差異，已逐漸成為研究中的瓶頸。NMT不僅可以檢測單細胞，還可以實現(xiàn)對細胞的原位檢測，以及對活體組織的在體檢測，很好地彌補了這一研究手段的空白。 2）安全性：NMT是用于研究活體材料的生理環(huán)境，其所檢測的Na+、H+、K+、Cl-等與細胞能量代謝、細胞凋亡、細胞形態(tài)維持等生理過程直接相關(guān)。 用途： 基于底層核心NMT技術(shù)，結(jié)合自身科研興趣，以及其它相關(guān)技術(shù)參數(shù)，在我方技術(shù)人員協(xié)助下形成技術(shù)解決方案，讓科研人員建立更具獨有創(chuàng)新特色的實驗平臺。 ? 參數(shù)： 1.基本功能： 1.1針對抗菌疫苗研究和研發(fā)設(shè)計 1.2活體、原位、非損傷檢測 1.3可檢測指標：H+、K+、Ca2+、Cl-、O2 1.4可實時監(jiān)測和記錄檢測時的環(huán)境參數(shù)：溫度、濕度、大氣壓、海拔、經(jīng)緯度 1.5配備新指標拓展功能 2.性能： 2.1自動化操作 2.2長時間實時和動態(tài)監(jiān)測 2.3無需標記 2.4立體3D流速檢測 3.軟件： 3.1imFluxes智能軟件，可直接檢測、輸出離子分子的濃度與流速，以及檢測時的環(huán)境參數(shù)

本成果是將人工合成的表達豬圓環(huán)病毒 2 型 Cap 蛋白的核苷酸 序列克隆到桿狀病毒表達載體中，構(gòu)建重組桿狀病毒，接種 Sf9 昆蟲細胞，經(jīng) 過懸浮培養(yǎng)、收獲、過濾，二乙烯亞胺 BEI 滅活病毒液后，加入適宜的佐劑混 合乳化制成。并利用自主分離鑒定副豬嗜血桿菌病多價流行菌株，通過優(yōu)化培 養(yǎng)工藝，提高副豬嗜血桿菌培養(yǎng)密度，成功研制了豬圓環(huán)病毒 2 型-副豬嗜血桿 菌多聯(lián)多價滅活疫苗。 

已有樣品/n牛傳染性鼻氣管炎ΔTK/ΔgE基因缺失標志活疫苗。　　成果簡介：本成果屬于動物傳染病基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）ΔTK/ΔgE基因缺失標志活疫苗及制備方法。所述的重組牛傳染性鼻氣管炎病毒毒株缺失了TK和gE基因。制備的牛傳染性鼻氣管炎ΔTK/ΔgE基因缺失標志活疫苗毒力大大降低，潛伏的病毒也不易被激活，具有很高的安全性。此外，除了被缺失的TK和gE基因，該缺失毒株仍能表達其他所有毒力基因，具有很好的免疫原性。本成果適用于奶牛、肉牛、耕牛等牛傳染性鼻氣管炎

研發(fā)階段/n研究開發(fā)了豬偽狂犬病油乳劑滅活苗及偽狂犬病乳膠凝集試驗診斷試劑盒兩項新產(chǎn)品，為我國預(yù)防與控制豬偽狂犬病填補了空白。豬偽狂犬病病毒油乳劑滅活疫苗獲得中華人民共和國農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的（一類）新獸藥證書。開發(fā)出新工藝3項，即豬偽狂犬病毒油乳劑滅活疫苗生產(chǎn)工藝、偽狂犬病乳膠凝集診斷試劑盒的制備工藝、高質(zhì)量酶標記兔抗豬IgG的制備工藝。其中豬偽狂犬病毒油乳劑滅活疫苗生產(chǎn)工藝及兔抗豬IgG酶標抗體制備工藝處于國際領(lǐng)先地位。除乳膠凝集試驗診斷試劑外還開發(fā)偽狂犬病診斷方法5種，包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、血凝

研發(fā)階段/n該發(fā)明屬于動物病毒學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。利用基因工程方法和DNA重組方法將PrV的主要毒力基因TK和糖蛋白基因gI、gE編碼區(qū)刪除，導(dǎo)致PrV毒力下降，公開了一種三基因缺失的重組偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PrV)毒株的構(gòu)建、用該毒株制備的疫苗、構(gòu)建該毒株的方法以及制備該疫苗方法說的重組偽狂犬病毒株缺失了TK、gE、gI基因，且不含外源基因。所說的疫苗屬于含有該發(fā)明的病毒液和明膠制成的凍干活疫苗。發(fā)明的重組-突變株遺傳穩(wěn)定，不會返強。該發(fā)明還包括將所說的活疫苗接種于仔豬、育肥豬

本工作成果構(gòu)建了新型可離子化脂質(zhì)分子庫，可通過排列組合形成數(shù)十個新型可離子化脂質(zhì)，已掌握脂質(zhì)納米顆粒構(gòu)建的核心技術(shù)。 一、項目分類 關(guān)鍵核心技術(shù)突破 二、技術(shù)分析 相對傳統(tǒng)疫苗（如滅活疫苗、重組蛋白疫苗等），mRNA 疫苗具有應(yīng)變能力快、制備簡單、免疫效力強等特點，在控制病毒傳染性疾病中具有至關(guān)重要的作用。脂質(zhì)納米顆粒（LNP）是介導(dǎo)mRNA在人體內(nèi)發(fā)揮功能的最優(yōu)解。Pfizer和Moderna公司構(gòu)建的LNP依然被認為是“best-in-class”的mRNA疫苗遞送技術(shù)。其中關(guān)鍵組分雙親性可離子化脂質(zhì)的合理設(shè)計可達到mRNA有效遞送和釋放。但脂質(zhì)納米顆粒核心技術(shù)專利集中于少數(shù)國外公司如Arbutus、Moderna、CureVac和BioNtech，專利壁壘高。目前，我國沒有自主研發(fā)的高效并安全的用于人體的mRNA遞送系統(tǒng)，致使歐美可隨時限制我國的mRNA疫苗生產(chǎn)。 本工作成果構(gòu)建了新型可離子化脂質(zhì)分子庫，可通過排列組合形成數(shù)十個新型可離子化脂質(zhì)，已掌握脂質(zhì)納米顆粒構(gòu)建的核心技術(shù)。目前已成功合成并進行活性驗證的新型可離子化脂質(zhì)4個。其中，脂質(zhì)A1-D1-5的活性最佳，基于其制備的LNP不但成功地載荷小干擾RNA在小鼠體內(nèi)有效地治療了代謝疾病，還實現(xiàn)了高效的mRNA負載和體內(nèi)遞送。代謝疾病的治療成果發(fā)表在國際學(xué)術(shù)期刊Science Advances上，mRNA負載系統(tǒng)已經(jīng)與多家公司開展合作進行臨床前開發(fā)工作。

本發(fā)明的目的是提供一種鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗，即采用生物技術(shù)對鴨坦布蘇病毒E蛋白進行抗原表位分析、拼接，獲得一種鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE，并以該融合蛋白作為抗原來制備鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗。本發(fā)明中鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE，其編碼蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO:1；其中一種核苷酸序列為SEQ ID NO:2。本發(fā)明利用pET28a（+）表達性載體構(gòu)建了能表達鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白DE的大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌。將重組表達的蛋白純化后制備成基因工程亞單位疫苗，可使免疫后鴨群獲得免疫保護。

本發(fā)明涉及一種利用噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因轉(zhuǎn)化制備鴨疫里默氏菌前菌影疫苗的方法與應(yīng)用方法。該方案首先將噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因通過柔性連接臂(Gly4Ser)3連接成串聯(lián)基因，并進一步構(gòu)建溫控表達載體pBV-E-SN。將pBV-E-SN電擊轉(zhuǎn)化進入鴨疫里默氏菌原生質(zhì)體，篩選陽性克隆28℃增菌培養(yǎng)。分離菌體加保護劑后分裝、冷凍干燥。本發(fā)明所制備的活菌疫苗經(jīng)飲水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激發(fā)體液免疫。