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本發(fā)明公開(kāi)了一種丁酸梭菌分泌的抗菌肽及其氨基酸序列和應(yīng)用。所述的抗菌肽氨基酸序列為序列表SEQ?ID?NO:1所示，分子量為2264.6道爾頓，等電點(diǎn)為8.64。其制備方法是：硫酸銨沉淀培養(yǎng)基中丁酸梭菌分泌的的抗菌肽，利用陽(yáng)離子交換、分子篩層析和反向高效液相色譜法純化抗菌肽。該抗菌肽具有顯著的抗菌活性，且不會(huì)對(duì)豬的紅細(xì)胞產(chǎn)生溶血作用，可用于開(kāi)發(fā)制備飼用抗菌藥物。

本發(fā)明提出用于鑒定蘋(píng)果抗炭疽菌葉枯病的SSR分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記分別為S0607039；S0607001；S0506206；S0506078,S0506001S0405195,S0405127,S0304673,S0304011。本發(fā)明還提出擴(kuò)增用于鑒定蘋(píng)果抗炭疽菌葉枯病的SSR分子標(biāo)記的引物。本發(fā)明通過(guò)自行設(shè)計(jì)的SSR標(biāo)記對(duì)蘋(píng)果抗炭疽菌葉枯病基因進(jìn)行了分子標(biāo)記，確定所在的染色體位置及遺傳距離，構(gòu)建了緊密連鎖的遺傳圖譜。距離抗性基因最近的分子標(biāo)記能準(zhǔn)確的鑒定出蘋(píng)果對(duì)炭疽菌葉枯病的抗性，為蘋(píng)果生產(chǎn)實(shí)踐及抗性育種提供有效工具，并為下一步抗性基因的克隆及功能驗(yàn)證奠定了良好的基礎(chǔ)。

項(xiàng)目簡(jiǎn)介本項(xiàng)目是國(guó)家博士后基金項(xiàng)目“農(nóng)藥電化學(xué)生物傳感器的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用”成果。以石 墨為原料，經(jīng)過(guò)強(qiáng)氧化劑氧化得到石墨氧化物，通過(guò)超聲剝離形成氧化石墨烯，將氧化 型石墨烯滴涂到絲網(wǎng)印刷電極表面后，經(jīng)過(guò)電化學(xué)還原形成具有催化性能的還原型石墨 烯傳感界面。該傳感器以多菌靈的電化學(xué)氧化峰電流為響應(yīng)信號(hào)，實(shí)現(xiàn)霧滴中多菌靈含 量的快速檢測(cè)。 性能指標(biāo) （1） 傳感器經(jīng)氧化型石墨烯修飾的絲網(wǎng)印刷電極在-0.7V 電位下電化學(xué)還原。 （2） 傳感器的檢測(cè)范圍為 3×10?9

在對(duì)珠江口的古菌類(lèi)群進(jìn)行連續(xù)一年的逐月觀測(cè)后，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是在豐水期，還是在枯水期，均檢測(cè)到MG-II在珠江口咸淡水混合區(qū)的高豐度，比已報(bào)道的其他海域的最高值還要高10倍，提示該類(lèi)群對(duì)珠江口環(huán)境的適應(yīng)性。利用宏基因組分離方法成功分離到首個(gè)河口環(huán)境的MG-II基因組，命名為MGIIa_P。MGIIa_P是第一個(gè)含有過(guò)氧化氫酶基因的MG-II宏基因組，同時(shí)也含有較高比例的糖苷水解酶，提示MG-II既能抵抗光和藻類(lèi)釋放的氧自由基，又可以利用光合藻類(lèi)產(chǎn)生的多糖，這可能是其對(duì)珠江口富營(yíng)養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)性的基因基礎(chǔ)。MG-II在珠江口的高豐度及異養(yǎng)代謝特征，提示該類(lèi)群在河口有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，而這些都是在之前的微生物海洋學(xué)研究中忽視的部分。

產(chǎn)品詳細(xì)介紹HiCC-F型自動(dòng)抑菌圈測(cè)定儀系統(tǒng)一、用途：用于自動(dòng)進(jìn)行抑菌圈測(cè)量、抗生素效價(jià)分析等二、主要性能參數(shù)指標(biāo)：1 ★成像配Epson Perfection V330 Photo超微立體彩色掃描成像儀（最高4800dpi、19mm大景深、微透鏡12 線矩陣CCD），亮度可調(diào)、自動(dòng)聚焦，能實(shí)現(xiàn)光學(xué)分辨率2960萬(wàn)像素的懸浮式暗視野成像，最大色彩深度48位適應(yīng)培養(yǎng)皿：50～180mm及A4幅面內(nèi)的矩形平板，同時(shí)測(cè)定6個(gè)90mm平皿2 ★抑菌圈測(cè)量（含抗生素效價(jià)自動(dòng)分析）1)一鍵式全自動(dòng)測(cè)定6個(gè)90mm直徑平皿中的所有抑菌圈，可全自動(dòng)測(cè)定局部粘連的抑菌圈，可在有局部文字干擾的情況下，自動(dòng)獲得抑菌圈面積、直徑等結(jié)果。測(cè)量分析耗時(shí)1～4秒鐘，能統(tǒng)一保存或查看閱讀相關(guān)各類(lèi)分析數(shù)據(jù)2)平皿可任意方向擺放。具有抑菌圈樣本自動(dòng)挑選、保真的可視化比對(duì)、編輯功能。抑菌圈測(cè)量系統(tǒng)的讀數(shù)分辨率≤0.001mm、最高光學(xué)測(cè)量分辨率≤0.0053mm，重復(fù)測(cè)量誤差≤±0.01mm或≤±0.1%；效價(jià)測(cè)量誤差≤±0.1%；效價(jià)重復(fù)測(cè)量誤差≤±0.1%；臺(tái)間測(cè)量差異≤0.2%3)符合中國(guó)藥典、USP美國(guó)藥典、EP歐洲藥典，可完成最新的國(guó)家藥典(2020版)一、二、三劑量及合并計(jì)算，以及全部菌種的抗生素效價(jià)分析。具有效價(jià)的組合優(yōu)化分析特性。3 數(shù)據(jù)導(dǎo)出：分析結(jié)果可保存，自動(dòng)形成Excel或PDF文檔報(bào)告。軟件具有在線升級(jí)特性。4 ★數(shù)據(jù)追溯、權(quán)限保護(hù)，操作記錄可追蹤回溯，符合GLP和GMP要求：采用多重系統(tǒng)構(gòu)架，分設(shè)職能與權(quán)限，確保數(shù)據(jù)信息的安全、完整、真實(shí)和可追溯。1)系統(tǒng)管理員：負(fù)責(zé)創(chuàng)建、管理所有普通管理員與操作員的賬戶，設(shè)置普通管理員和操作員的權(quán)限。系統(tǒng)管理員只有一個(gè)，擁有系統(tǒng)最高權(quán)限。2)普通管理員：負(fù)責(zé)全部測(cè)試數(shù)據(jù)的審核、存檔管理、以及其他系統(tǒng)數(shù)據(jù)的管理。系統(tǒng)可分配多個(gè)普通管理員，其權(quán)限由系統(tǒng)管理員設(shè)置分配。3)操作員：負(fù)責(zé)樣品制作、測(cè)試、修正、形成電子報(bào)告、提交審核等。系統(tǒng)可分配多個(gè)操作員，其權(quán)限由系統(tǒng)管理員設(shè)置分配。4)所有賬戶都可自行修改登錄密碼，設(shè)置自己的電子簽名并輸出到報(bào)告。5)系統(tǒng)自動(dòng)記錄每個(gè)賬戶的操作記錄，系統(tǒng)管理員可對(duì)操作記錄進(jìn)行追溯、查看、輸出等。5 測(cè)量功能：全自動(dòng)尺寸標(biāo)定，也可人工標(biāo)定。可鼠標(biāo)拖動(dòng)精確測(cè)量長(zhǎng)度、角度、弧度、面積、弧線、任意曲線。6 系統(tǒng)配置：萬(wàn)深HiCC-F型自動(dòng)抑菌圈測(cè)量分析軟件、鎖及附件  1套Epson Perfection V330 Photo超微立體彩色掃描成像儀   1臺(tái)萬(wàn)深HiCC系列自動(dòng)抑菌圈測(cè)量?jī)x專用標(biāo)準(zhǔn)板 1片（附1份權(quán)威校準(zhǔn)認(rèn)證書(shū)）7．環(huán)境條件： 溫度10~30℃，相對(duì)濕度≤85%，防止強(qiáng)光照射。儀器應(yīng)放在平穩(wěn)工作臺(tái)上，周?chē)鸁o(wú)強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾；電源要求220V±10%，50Hz。推薦選配：品牌電腦（酷睿i5 CPU / 8G內(nèi)存/ 19.5”彩顯/無(wú)線網(wǎng)卡，5個(gè)以上USB2.0口，運(yùn)行環(huán)境Windows 10完整專業(yè)版或旗艦版）

產(chǎn)品詳細(xì)介紹HiCC-S1型全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)及抑菌圈測(cè)量?jī)x系統(tǒng)一、主要性能參數(shù)指標(biāo)：1 成像裝置1)中晶ScanMaker i800 Plus上下LED雙光源彩色掃描成像，亮度可調(diào)、自動(dòng)聚焦，能實(shí)現(xiàn)光學(xué)分辨率2960萬(wàn)像素的均勻背光、暗視野成像，最大色彩深度48位，及自動(dòng)對(duì)焦的大景深800萬(wàn)像素拍攝裝置2)適應(yīng)培養(yǎng)皿：50～180mm及A4幅面內(nèi)的矩形平板，同時(shí)測(cè)定6個(gè)90mm平皿（傾注、涂布、膜濾、螺旋平皿、3M紙片）2 菌落計(jì)數(shù)分析自動(dòng)識(shí)別統(tǒng)計(jì)：SmartdownTM菌落智能識(shí)別技術(shù)，具有菌落目標(biāo)自動(dòng)增強(qiáng)特性，自動(dòng)識(shí)別大規(guī)模團(tuán)狀、鏈狀粘連的長(zhǎng)形桿菌（顯微形態(tài)大片粘連的大腸桿菌、病菌孢子）及平皿上的各類(lèi)菌落（含金色葡萄球菌計(jì)數(shù)（GB4789.10-2016）、大腸菌群測(cè)定（GB4789.3-2016）等等）。可自動(dòng)形成批處理向?qū)В瑢?shí)現(xiàn)一鍵式自動(dòng)計(jì)數(shù)自動(dòng)計(jì)數(shù)精度≥96.5%，最多監(jiān)視修正3.5%，即達(dá)100%正確。分析統(tǒng)計(jì)速度：150～800個(gè)菌落/s，大通量6平皿分析時(shí)每平皿成像+計(jì)數(shù)總耗時(shí)≤5秒菌落粘連分割：自動(dòng)分割相互成片粘連的長(zhǎng)形、圓形等菌落目標(biāo)，用戶可選擇分割或不分割。還可手動(dòng)分割、合并菌落目標(biāo)圖像顏色形狀識(shí)別：具有快速水平集提取技術(shù)，可按20類(lèi)分類(lèi)識(shí)別計(jì)數(shù)特定顏色、形狀的菌落數(shù)量，并可類(lèi)別轉(zhuǎn)換修正。可同時(shí)選擇6個(gè)目標(biāo)區(qū)自動(dòng)分別分析，并自由增減或編輯分析目標(biāo)區(qū)菌落形態(tài)分析：自動(dòng)獲得各菌落面積、等效直徑、長(zhǎng)軸、短軸、長(zhǎng)寬比、圓度、周長(zhǎng)、形狀系數(shù)等。可按形態(tài)指標(biāo)過(guò)濾查詢。鼠標(biāo)點(diǎn)擊修正，無(wú)痕剔除網(wǎng)格及文字，自動(dòng)剔除雜質(zhì)，有效支持復(fù)雜微生物統(tǒng)計(jì)，符合GB4789.2-2016的參數(shù)自動(dòng)換算特性。3抑菌圈測(cè)量一鍵式全自動(dòng)測(cè)定6個(gè)90mm直徑平皿中的所有抑菌圈，可全自動(dòng)測(cè)定局部粘連的抑菌圈，可在有局部文字干擾的情況下，自動(dòng)獲得抑菌圈面積、直徑等結(jié)果。測(cè)量分析耗時(shí)1～4秒鐘，能統(tǒng)一保存或查看閱讀相關(guān)各類(lèi)分析數(shù)據(jù)平皿可任意方向擺放。具有抑菌圈樣本自動(dòng)挑選、保真的可視化比對(duì)、編輯功能。抑菌圈測(cè)量系統(tǒng)的讀數(shù)分辨率≤0.001mm、最高光學(xué)測(cè)量分辨率≤0.0053mm，重復(fù)測(cè)量誤差≤±0.01mm或≤±0.1%；效價(jià)測(cè)量誤差≤±0.1%；效價(jià)重復(fù)測(cè)量誤差≤±0.1%；臺(tái)間測(cè)量差異≤0.2%符合中國(guó)藥典、USP美國(guó)藥典、EP歐洲藥典，可完成最新的國(guó)家藥典(2020版)一、二、三劑量及合并計(jì)算，以及全部菌種的抗生素效價(jià)分析。具有效價(jià)的組合優(yōu)化分析特性。可按食品添加劑 乳酸鏈球菌素QB 2394-2007標(biāo)準(zhǔn)，全自動(dòng)同時(shí)測(cè)量24個(gè)以上抑菌圈并自動(dòng)分析出效價(jià)內(nèi)置美國(guó)CLSI“抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)”最新第25版(2015)全部數(shù)據(jù)，提供數(shù)據(jù)輸入和修改平臺(tái)，方便更新，為紙片法藥敏分析提供快捷工具4數(shù)據(jù)導(dǎo)出：分析圖像與數(shù)據(jù)結(jié)果可保存，可直接報(bào)告結(jié)果，無(wú)需手工計(jì)算，結(jié)果可以直接導(dǎo)出到Excel或PDF文檔報(bào)告。軟件具有在線升級(jí)特性。5 數(shù)據(jù)追溯、權(quán)限保護(hù)，操作記錄可追蹤回溯，符合GLP和GMP要求：采用多重系統(tǒng)構(gòu)架，分設(shè)職能與權(quán)限，確保數(shù)據(jù)信息的安全、完整、真實(shí)和可追溯。1）、系統(tǒng)管理員：負(fù)責(zé)創(chuàng)建、管理所有普通管理員與操作員的賬戶，設(shè)置普通管理員和操作員的權(quán)限。系統(tǒng)管理員只有一個(gè)，擁有系統(tǒng)最高權(quán)限。2）、普通管理員：負(fù)責(zé)全部測(cè)試數(shù)據(jù)的審核、存檔管理、以及其他系統(tǒng)數(shù)據(jù)的管理。系統(tǒng)可分配多個(gè)普通管理員，其權(quán)限由系統(tǒng)管理員設(shè)置分配。3）、操作員：負(fù)責(zé)樣品制作、測(cè)試、修正、形成電子報(bào)告、提交審核等。系統(tǒng)可分配多個(gè)操作員，其權(quán)限由系統(tǒng)管理員設(shè)置分配。4）、所有賬戶都可自行修改登錄密碼，設(shè)置自己的電子簽名并輸出到報(bào)告。5）、系統(tǒng)自動(dòng)記錄每個(gè)賬戶的操作記錄，系統(tǒng)管理員可對(duì)操作記錄進(jìn)行追溯、查看、輸出等。6 測(cè)量功能：全自動(dòng)尺寸標(biāo)定，也可人工標(biāo)定。可鼠標(biāo)拖動(dòng)精確測(cè)量長(zhǎng)度、角度、弧度、面積、弧線、任意曲線。7配置：萬(wàn)深HiCC系列全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)分析及抑菌圈測(cè)量分析軟件、鎖及附件 1套Microtek ScanMaker i800 Plus雙光源彩色掃描成像儀1臺(tái)自動(dòng)對(duì)焦的大景深800萬(wàn)像素拍攝裝置1套萬(wàn)深HiCC系列自動(dòng)抑菌圈測(cè)量?jī)x專用標(biāo)準(zhǔn)板 1片（附1份權(quán)威校準(zhǔn)認(rèn)證書(shū)）品牌電腦（酷睿i5 CPU / 8G內(nèi)存/ 19.5”彩顯/無(wú)線網(wǎng)卡，5個(gè)以上USB2.0口，運(yùn)行環(huán)境Windows 10完整旗艦版）  1臺(tái)7．環(huán)境條件：溫度10~30℃，相對(duì)濕度≤85%，防止強(qiáng)光照射。儀器應(yīng)放在平穩(wěn)工作臺(tái)上，周?chē)鸁o(wú)強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾；電源要求220V±10%，50Hz。

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:本發(fā)明提供了一種從紅豆杉中培養(yǎng)篩選產(chǎn)紫杉醇菌的方法.本發(fā)明的方法包括以下步驟:1)對(duì)紅豆杉植物的組織進(jìn)行培養(yǎng),分離純化獲得內(nèi)生真菌;2)培養(yǎng)步驟1)中獲得的內(nèi)生真菌,利用薄層層析對(duì)發(fā)酵代謝物進(jìn)行初篩,篩出可產(chǎn)紫杉醇或其類(lèi)似物的菌株;3)結(jié)合細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),測(cè)定出代謝物對(duì)CHO細(xì)胞的抑制率;4)利用高效液相色譜對(duì)其作了進(jìn)一步分析,確定產(chǎn)紫杉醇菌株.本發(fā)明提供的從紅豆杉分離產(chǎn)紫杉醇的方法過(guò)程簡(jiǎn)單,成本較低.并且通過(guò)本發(fā)明提供的方法提取得到的產(chǎn)紫杉醇菌用于微生物培養(yǎng)時(shí),獲得紫杉醇的含量大大增加,該方法為微生物工程提供了更廣闊的途徑.

成果描述：本課題采用理性設(shè)計(jì)的策略，通過(guò)基因重組的手段構(gòu)建雜合抗菌肽LfcinB-P-CB，具有活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)對(duì)抗菌肽工程菌發(fā)酵優(yōu)化，及抗菌肽純化、制劑工藝研究，建立中試規(guī)模的抗菌肽制劑的制備體系。抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無(wú)明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無(wú)溶血性；實(shí)現(xiàn)雜合抗菌肽LfcinB-P-CB在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用，解決抗生素等化學(xué)抗菌材料造成了日益嚴(yán)重的環(huán)境問(wèn)題，降低某些物質(zhì)會(huì)以原型或代謝物形式排泄造成環(huán)境污染使環(huán)境中出現(xiàn)耐菌株的可能性，從而給人類(lèi)生存環(huán)境構(gòu)成危害。市場(chǎng)前景分析：據(jù)國(guó)外報(bào)道，歐洲各國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)、養(yǎng)豬業(yè)及養(yǎng)禽場(chǎng)無(wú)一例外普遍在配合飼料中添加了上述獸用抗生素作為“動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑”。泰洛星已成為當(dāng)今世界上頭號(hào)獸用抗菌劑，去年泰洛星的銷(xiāo)售額高達(dá)2.75億美元。我國(guó)當(dāng)前的動(dòng)物養(yǎng)殖面臨越來(lái)越嚴(yán)峻的疫病困擾，因此抗菌肽產(chǎn)品在動(dòng)物保健方面的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用在我國(guó)需求巨大。2010年全國(guó)動(dòng)物用抗菌肽類(lèi)產(chǎn)品年銷(xiāo)售額接近一億元，但抗菌肽的總市場(chǎng)容量至少超過(guò)100億。因此本項(xiàng)目開(kāi)發(fā)的抗菌肽具有廣闊的市場(chǎng)前景。與同類(lèi)成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：抗菌效果達(dá)到雜合肽LPCB與Amp（50 μg/mL）抑菌直徑之比大于1.0；耐熱性強(qiáng)，在100 ℃條件下維持3 h活性無(wú)明顯降低；有一定的耐酸堿性，在pH 2~10的環(huán)境中仍能保持較高的活性；安全性高，對(duì)真核細(xì)胞幾乎無(wú)溶血性；

本實(shí)用新型涉及一種用于刺吸式小型昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌滅活的飼喂裝置。該裝置包括自上而下依次設(shè)置的蓋體結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)容器和通氣結(jié)構(gòu)；所述蓋體結(jié)構(gòu)包括頂蓋和設(shè)置在所述頂蓋的下側(cè)面的飼喂液腔；飼喂液腔的底面為PTFE濾膜；所述培養(yǎng)容器為兩端開(kāi)口的圓筒形結(jié)構(gòu)。本實(shí)用新型所述用于刺吸式小型昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌滅活的飼喂裝置，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低廉，易于操作，同時(shí)有效降低刺吸式昆蟲(chóng)的死亡率。

本發(fā)明提出一種秸稈還田纖維分解性生防真菌及菌劑和應(yīng)用，其中該菌株F7JX993849的分類(lèi)命名為綠木霉Trichoderma?virens，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCC?No.3.17613。本發(fā)明的綠木霉Trichoderma?virens?F7JX993849對(duì)農(nóng)作物秸稈中的纖維素、半纖維素和果膠組分同時(shí)具有較強(qiáng)的分解能力。其次，本發(fā)明的綠木霉Trichoderma?virens?F7JX993849可以拮抗植物病源菌入侵，具有生物防治功能。再次，本發(fā)明的秸稈還田纖維分解性生防真菌所制成的菌劑，可以解決一般秸稈腐熟劑在應(yīng)用過(guò)程中效果不理想、不穩(wěn)定的問(wèn)題，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。