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本發(fā)明公開(kāi)了一種水稻稻瘟病抗性基因 Pike 及其應(yīng)用，涉及一種水稻稻瘟病抗性基因 Pike 的克隆 及其編碼蛋白與應(yīng)用，還涉及根據(jù)該基因產(chǎn)生的功能性分子標(biāo)記及應(yīng)用，屬于水稻抗病育種領(lǐng)域。水稻 稻瘟病抗性基因 Pike 包括 Pike-1 和 Pike-2，其基因組核苷酸序列分別如 SEQ?ID?NO.1 和 SEQ?ID?NO.2 所示，編碼的蛋白的氨基酸序列分別如&n

中試階段/n該成果屬于農(nóng)業(yè)微生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗草甘膦5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因的分離鑒定，所述的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所述，該基因編碼的蛋白質(zhì)的序列如SEQ?ID?NO：2所述。5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS）基因是根據(jù)Genbank中報(bào)導(dǎo)的放線細(xì)菌Isoptericola?Variabilis的aroA基因序列合成得到，包含該基因質(zhì)粒的重組大腸桿菌LZD002保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物

該成果通過(guò)對(duì)水稻胚乳中與支鏈淀粉合成相關(guān)酶基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因調(diào)控，控制稻米中支鏈淀粉的合成，相對(duì)提高直鏈淀粉含量，選育獲得了多個(gè)富含抗性淀粉的轉(zhuǎn)基因水稻新品系，其中的直鏈淀粉含量超過(guò) 50%、抗性淀粉含量最高可達(dá) 15%。培育的高抗性淀粉稻米其抗性淀粉含量最高可達(dá) 15%，能夠明顯改善動(dòng)物腸道健康，消除糖尿病病人餐后的高血糖現(xiàn)象。

        我國(guó)精神疾病發(fā)病率高且增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯，是我國(guó)推進(jìn)國(guó)民大健康戰(zhàn)略所面臨的巨大挑戰(zhàn)。然而當(dāng)前精神疾病臨床診斷缺乏發(fā)病機(jī)制的依據(jù)，主要以臨床表型為指標(biāo)。多數(shù)精神疾病的發(fā)病原因與人體基因新發(fā)突變相關(guān)，這種不在父代而僅在子代發(fā)生的基因變異對(duì)精神疾病的臨床診療極具重要性。         研發(fā)團(tuán)隊(duì)建立了從患者新發(fā)突變基因組學(xué)到轉(zhuǎn)錄組、蛋白組學(xué)的完整生物組學(xué)發(fā)病機(jī)制臨床輔助診斷系統(tǒng)，填補(bǔ)了精神疾病臨床診斷的組學(xué)機(jī)制評(píng)價(jià)空白，系統(tǒng)自動(dòng)生成輔助診斷報(bào)告和用藥風(fēng)險(xiǎn)分析，具有顯著的臨床應(yīng)用價(jià)值，符合領(lǐng)域發(fā)展的國(guó)際行業(yè)趨勢(shì)，具有巨大的市場(chǎng)推廣潛力。         意向開(kāi)展成果轉(zhuǎn)化的前提條件：中試放大及產(chǎn)業(yè)化工藝開(kāi)發(fā)資金支持

一、成果簡(jiǎn)介 化學(xué)農(nóng)藥防治病害給環(huán)境和生態(tài)造成了污染，同時(shí)也給食用安全留下隱患。小分子誘導(dǎo)植物自身獲得系統(tǒng)性抗病能力，具有環(huán)境友好、綠色安全、穩(wěn)定持久和廣譜高效特點(diǎn)，為植物病害的綠色 高效防控提供了新的思路。該項(xiàng)技術(shù)篩選一類分子量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、組織分布廣泛、生物效應(yīng)多樣、免疫原性低、本身不殺菌但可誘發(fā)植物自身主動(dòng)抗性的小分子活性物質(zhì)，構(gòu)建抗病、抗低溫和定向 品質(zhì)提升技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)不用

以不同來(lái)源的淀粉為原料，將物理熱處理與化學(xué)水解方法相結(jié)合，開(kāi)發(fā)出新 型高品質(zhì)抗性淀粉。其抗性淀粉含量達(dá)到 60%以上，并且在經(jīng)過(guò)蒸煮、烘焙等加工處理后，其抗性淀粉含量沒(méi)有發(fā)生變化，因此具有較好的熱穩(wěn)定性。所用原料不含任何化學(xué)試劑，綠色、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保。 創(chuàng)新要點(diǎn) 本產(chǎn)品具有抗性淀粉含量高、熱穩(wěn)定性強(qiáng)、天然、綠色等特點(diǎn)。與酶法改性制備抗性淀粉工藝相比，本抗性淀粉生產(chǎn)成本低，且操作簡(jiǎn)便、安全與化學(xué)改性制備抗性淀粉工藝相比，整個(gè)工藝經(jīng)濟(jì)、環(huán)保、不采用任何化學(xué)試劑。 

發(fā)現(xiàn)血清抗性菌最重要的代謝特征為甘氨酸-絲氨酸-蘇氨酸代謝通路顯著下調(diào)，采用外源甘氨酸、絲氨酸或蘇氨酸重編細(xì)菌代謝組，可以大大提高對(duì)血清補(bǔ)體的敏感性，同時(shí)也可以提高對(duì)抗生素的敏感性。其主要機(jī)制為外源甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸促進(jìn)三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸的積累，以抑制ATP合酶；同時(shí)高濃度甘氨酸抑制嘌呤通路合成ATP; 使ATP合成的兩條主要途徑同時(shí)受到抑制，導(dǎo)致ATP生成下降；進(jìn)而下調(diào)cAMP/CRP復(fù)合物，上調(diào)細(xì)菌外膜補(bǔ)體結(jié)合蛋白HtrE, NfrA和YhcD表達(dá)。高濃度的甘氨酸還可以增加質(zhì)子動(dòng)力勢(shì)，促進(jìn)血清補(bǔ)體與補(bǔ)體結(jié)合蛋白的結(jié)合，逆轉(zhuǎn)血清抗性，實(shí)現(xiàn)血清補(bǔ)體高效殺菌（如上圖所示）。甘氨酸促進(jìn)補(bǔ)體殺菌在人血清、小鼠血清、豬血清、魚(yú)血漿和對(duì)蝦血漿均獲得相似結(jié)果，在BALB/c小鼠和Rag1-/-（無(wú)T- 和B- 細(xì)胞免疫）細(xì)胞缺陷小鼠體內(nèi)也得到證實(shí)，為控制人類和動(dòng)物養(yǎng)殖病原菌感染提供了新的思路。       該研究不僅在解決百年難題上取得突破性進(jìn)展，且在機(jī)制上有兩個(gè)新發(fā)現(xiàn)：一是發(fā)現(xiàn)一條新的能量代謝調(diào)節(jié)通路，二是發(fā)現(xiàn)代謝物可以優(yōu)于基因調(diào)控來(lái)主導(dǎo)物質(zhì)代謝流向。

抗性淀粉具有淀粉特性，卻不易被人體小腸消化，可作為低血 糖生成指數(shù)的功能性食品，納米級(jí)抗性淀粉因其具有納米效應(yīng)，以及大的比表 面積，大量的表面電荷和活性羥基，且抗消化等優(yōu)勢(shì)，在作為藥物緩釋及靶向 釋放等方面具有重要的應(yīng)用潛力，可應(yīng)用于功能性食品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域。 隨著納米技術(shù)在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域的快速發(fā)展，人們對(duì)納米尺度材料的研 究應(yīng)運(yùn)而生，而功能性納米抗性淀粉更是研究的熱點(diǎn)。多糖大分子例如淀粉和 纖維素等是天然形成的在大自然中大量存在的化合物，具有天然、安全和生物 相容等特點(diǎn)。近年來(lái)，國(guó)外對(duì)抗性淀粉的制備研究非常活躍，發(fā)展迅速，并申 報(bào)和發(fā)表了許多制備抗性淀粉的專利與文獻(xiàn)。根據(jù)發(fā)表在美國(guó)《糖尿病,營(yíng)養(yǎng)與 代謝》Diabetes,Nutrition&Metabolism、《美國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)學(xué)雜志》AmJClinNutr、 《中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志》等國(guó)內(nèi)外大量臨床實(shí)驗(yàn)報(bào)告表明，納米級(jí)抗性淀粉有助 于改善胰島素抵抗（即增加胰島素敏感性）、降低血糖、降低血脂、調(diào)節(jié)代謝 紊亂等。而我國(guó)對(duì)抗性淀粉的制備研究正處于起步階段，目前對(duì)于這種抗消化 納米淀粉的綠色制備，國(guó)內(nèi)外均未有報(bào)道。 技術(shù)優(yōu)點(diǎn)或者效益預(yù)測(cè):生物酶法制備的納米抗性淀粉，具有更好地生物相 容性，加工容易，成本低，抗消化等優(yōu)勢(shì)，可廣泛應(yīng)用于功能性食品、藥物包 埋、緩釋、包衣填充等領(lǐng)域，且這種技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：1、原料來(lái)源廣、安全、 可再生；2、操作簡(jiǎn)單，適合大規(guī)模生產(chǎn)；3、適用于普通儀器設(shè)備，對(duì)設(shè)備儀 器面沒(méi)有腐蝕性；4、原料利用率高，耗能低，得率高；5、綠色生產(chǎn)，產(chǎn)品可 放心食用。

可以量產(chǎn)/n該成果屬于基因表達(dá)分析技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了CmEF1α基因和CmRAN基因在分析甜瓜果實(shí)的基因表達(dá)時(shí)作為內(nèi)參基因的應(yīng)用，本發(fā)明還公開(kāi)了一種采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析甜瓜果實(shí)基因表達(dá)的方法，它是將CmEF1α基因和CmRAN基因組合的幾何平均數(shù)作為甜瓜果實(shí)基因表達(dá)分析中的內(nèi)參基因。CmEF1α基因和CmRAN基因在不同坐果方式的甜瓜果實(shí)的不同發(fā)育階段均能穩(wěn)定表達(dá)，是甜瓜果實(shí)發(fā)育過(guò)程中利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)基因表達(dá)分析的可靠?jī)?nèi)參基因組合。該成果具有可靠性和實(shí)用性，能夠顯著提